Selective mastoporan inhibition of muscarinic activation of bovine tracheal smooth muscle

Muscarinic activation of bovine tracheal smooth muscle (BTSM) leading to smooth muscle contraction involves the generation of two cGMP signals (20 and 60 s), being 20s peak associated with soluble (sGC) and the second (60s) to membrane-bound Natriuretic Peptide- receptor-Guanylylcy clases (NPR-GC). In this study, we showed that pre-incubation of isolated BTSM strips with mastoparan and superactive mastoparan (mastoparan 7) decreased significantly the muscarinic dependent contractile smooth muscle responses in dose-dependent and non-competitive manner. Moreover, mastoparan (50 nM) inhibited completely the BTSM-muscarinic contractile responses and affected dramatically the carbachol-dependent cGMP signals being the first cGMP signal inhibited in a 63 ± 5%, whereas the second signal disappeared. Mastoparan inhibition of muscarinic activation is specific since other spasmogens as serotonin and histamine fully contracted these BTSM strips under mastoparan treatment. Cyclic GMP levels were evaluated by exposing BTSM strips to activators of NO-sensitive sGC as Sodium Nitroprussiate (SNP) and Natriuretic Peptides as CNP-53 for membrane-bound NPR-GC. Thus, SNP and CNP increased in a binary way, in more than 20 fold cGMP levels at 30-40 s being both increments inhibited by mastoparan. Furthermore, the Gi/o-protein involvement on mastoparan inhibition of cGMP elevations induced by CNP and SNP is suggested by Pertussis toxin pre-treatment, which reversed mastoparan effects. These results indicate that muscarinic signal transduction cascades leading to airway smooth muscle contractions involved two different guanylyl cyclases being both regulated by mastoparan-sensitive G-proteins. ANP, Natriuretic Peptide type A; ASM, Airway Smooth Muscle; BTSM, Bovine Tracheal Smooth Muscle; CNP-53, Natriuretic Peptide type C-53; GPCR, G-Protein Coupled Receptor; Gq16, Heterotrimeric G protein subtype 16; Gi/o, Heterotrimeric G protein subtype...

La activación muscarínica del músculo liso de las vías aéreasrelacionada a la contracción de dicho músculo liso esta asociada a la generación de dos señales de GMPc (20 y 60 s), siendo la señal de los 20s relacionado a la activación de la guanililciclasa soluble mientras que el pico de los 60s a la guanililciclasa unida membranas y sensible a péptidos natriuréticos (NPR-GC). En este trabajo, nosotros mostramos que la pre-incubación de fragmentos del músculo liso traqueal de bovino (BTSM) con mastoparan y su análogo superactivo (mastoparan 7), en una forma dosis dependiente, son capaces de disminuir de manera significativa la actividad contráctil dependiente de agentes muscarinicos. Adicionalmente, mastoparan (50 nM) inhibió completamente la respuesta contráctil muscarinica del BTSM y afectó dramáticamente los picos de GMPc asociados a la activación muscarinica siendola primera señal inhibida en un 63 ± 5%, mientras que la segunda señal desapareció completamente. Esta inhibición del mastoparan de la activación muscarínica es especifica ya que otros espamogenos como la serotonina y la histamina fueron capaces de inducir respuestas máximas en presencia del mastoparan y su análogos. Este efecto del mastoparan sobre los niveles del GMPc fue evaluado en presencia de otros agentes generadores de este segundo mensajero como son el nitroprusiato de sodio (SNP) que activa la guanililciclasa soluble sensible a NO y los péptidos natriureticos como el CNP-53 (CNP) activador de la NPR-GC asociada a membranas plasmáticas. Tanto, el SNP como el CNP aumentaronen mas de 50 veces los niveles de GMPc a los 30-40 s en forma bifasica, siendo estos incrementos inhibidos de manera significativa por el mastoparan. Ademas, se sugiere la participación de proteínas Gi/o en los efectos inhibitoriosdel mastoparan, porque la Toxina pertussis revertió los efectos inhibitorios. Estos resultados indican que la cascada de activación muscarinica que conduce...

Papel de las PDE Ic en la contracción del músculo liso de las vías aéreas: futuras drogas broncorelajadoras / Peiper of the PDE Ic in the contraction airway smooth muscle bronchorelaxing drugs future

En el músculo liso traqueal, los antagonistas muscarínicos (atropina) incrementan simultáneamente los niveles basales de los nucleóticos cíclicos (AMPc, GMPc), dependiendo del tiempo y dosis con máximo a 15 min y pEC50 7.4 mas o menos 0.2. El IBMX (10 µM), inhibidor no selectivo de PDEs, induce una respuesta similar. Sin embargo, la atropina potencial los incrementos del AMPc inducidos por 10 µM Rolipram (inhibidor PDE-IV) y los del GMPc producidos por µM Zaprinast (inhibidor PDE-V), sugiriendo la inhibición de una PDE que hidrolice ambos nucleótidos. La Vinpocetina (20 µM), inhibidor de PDE-Ic no dependiente de Calmodulina, produjo una respuesta semejante al antagonista muscarínic. Además, la atropia inhibió la PDE-Ic de las membranas celulares y no afectó la PDE-I cistosólca. Los antagonistas muscarínicos actúan como "agonistas inversos" sobre los m2/m3 AChR del sarcolema, iniciando una novedosa cascada que inhibe la PDE-Ic, provocando el incremento simultáneo del AMPc y GMPc en este tejido

La guanililciclasa acoplada a proteínas G: un novedoso sistema de transducción de señales en el músculo liso de las vías áereas / The guanylylcyclases adjusted G protein: a system of transduction new of sings in the airway smooth muscle

Las guanililciclasas (GCs) son enzimas reponsables de la formación del GMP cíclico a partir del GTP. En las células de mamíferos hay 2 sistemas implicados en la síntesis del GMPc. Así, una GC soluble de naturaleza hemoproteica, es el receptor intracelular al óxido nítrico (NO) vinculado a la formación de GMPc que participa en la relajación del músculo liso vascular. Un segundo grupo esta integrado por las GC asociadas a membranas, que pueden ser clasificadas como 1.-GC activadas por el Ca²+.2.- Las GC sensibles a péptidos natriuréticos (NP-GCs) GC-A,B y C. 3.- Las GC asociadas a receptores "huerfanos" (GC-D,E,F,G) 4.- Las GC acopladas proteínas G. Este último tipo de GC es el motivo de esta revisión. Nuestros resultados demostraron por primera vez que existe una GC acoplada a proteínas G en una fracción de menbrana plasmática del músculo liso de las vías aéreas. Esta enzima es activada por agonistas muscarínicos requeriendo NaCI para dicha activación. Esta activación muscarínica es mediada a través de un receptor muscarínico M3 mAChR acoplado a una proteína G insensible a toxina pertussis (PTX) denominada GA. Aún mas, una inhibición muscarínica fue también observada y es por un receptor M2 AChR acoplado a una proteína G sensible a PTX del tipo Gi/o. Recientemente hemos encontrado que la GC acoplada a proteínas G es una isoforma de la NP-GC-B, lo cual sugiere un estrecha comunicación de la cascada de señalización de los receptores muscarínicos y la GC estimulada por CNP. Estos resultados originales arrojaran nuevas ideas sobre el papel del músculo liso de las vías aéreas en la fisiopatología del asma broquial

Regulation of histamine secretion in a mast cell line

La interacción del alergeno con su lg-E específica anclada en la superficie externa de la membrana plasmática del mastocito desencadena la liberación de histamina de dicha célula. Este proceso requiere la presencia de calcio extracelular y de energía bajo la forma de ATP proveniente fundamentalmente de glicólisis donde el lactato es el producto final. La heterogeneidad de los mastocitos ha sido previamente descrita en diversos tejidos de diferentes especies animales. Así, esta línea celular tumoral en ratones LAF1 mostró propiedades similares a las descritas para los mastocitos presentes en la cavidad peritoneal de la rata. Las respuestas metabólicas relacionadas a la secreción de histamina también fueron estudiadas en esta línea de mastocinoma, que exhibieron un comportamiento diferente dependiendo del secretagogo utilizado. En este sentido, una fuerte estimulación de la glicólisis fue observada la presencia de Concanavalina-A en comparación con la estimulación inducida por el A-23187 y el compuesto 48/80. En este modelo experimental se logró establecer relaciones entre la liberación de histamina con el consumo de glucosa, la produción de lactato y la carga adenílica bajo la forma de ATP

La activación muscarínica del músculo liso de las vías aéreas / The muscarinic activation of smooth muscle of airway

La activación de receptores muscarínicos del músculo de las vías aéreas provoca la generación de varios segundos mensajeros (AMPc e GMPc e IP3). La activación del receptor muscarínico M3 producida por el carbacol induce a incrementos significativos en los segundos mensajes antes mencionados. Después de la adición de carbacol, una cinética diferente fue encontrada para estos segundos mensajeros. El IP3 mostró un primer pico (10 seg), el cual precede el inicio de la contracción muscular lisa. Además, un segundo pico de este segundo mensaje de inositol fue detectado a los 60 segundos. Con respecto a los nucleótidos ciclicos, el AMPc mostró un solo pico a los 20 segundos y el GMPc mostró la existencia de dos picos. Así, este último nucleótico mostró un primer pico a los 20 segundos, el cual coincide con el pico de AMPc y un segundo pico a los 60 segundos, después que la contracción muscular lisa se estabilizó. El último pico parece ser sensible a los atrapadores de grupos NO como es el azul de metileno, sugiriendo a la guanililciclasa soluble como la enzima responsable de este segundo pico. Adicionalmente; el KCL es capaz de inducir la contracción del músculo liso que parece ser diferente en varios aspectos a la activación muscarínica del músculo liso de las vías aéreas